Sumar Raport de etapa Noiembrie 2006
 
Partea 1
Efectele quercetinei asupra receptorului nicotinic de acetilcolina

    Ne-am propus in cadrul acestui proiect investigarea efectelor quercetinei asupra receptorului nicotinic, prin metode electrofiziologice – patch clamp. O posibila actiune a quercetinei asupra acestui tip de receptor este sugerata de interferenta acesteia cu membranele biolologice, dar si de efectul deja cunoscut cu alte tipuri de canale ionice (canale de Cl tip CFTR, canale de calciu) (Illek 1998, Lee 2002, Schultz 1999). Experimentele au fost efectuate pe celule apartinand linie TE671LH – linie de celule de rabdomiosarcom uman, care exprima nativ receptori nicotinici. Studiile au fost realizate in configuratia whole-cell, in care s-au inregistrat curentii tranzitorii rezultati prin activarea receptorului nicotinic de catre acetilcolina (aplicata cu un sistem rapid de aplicare a solutiilor). Masuratorile au fost efectuate in absenta si in prezenta quercetinei aplicata in baia de celule, in concentratii de 10μM si 50μM, dizolvata in DMSO (concentratiile in baia de celule nu au depasit limita admisa de 1%, iar experimentele control au confirmat lipsa actiunii directe a DMSO-ului asupra receptorului nicotinic).

Fig. 1.

    Rezultatele preliminare prezentate orienteaza asupra direcţiilor de continuare a cercetărilor referitoare la efectele quercetinei.

Prima din aceste directii este referitoare la efectul quercitinei asupra amplitudinii curentilor declansati de acetilcolina. Desi numarul de celule este deocamdata prea mic pentru a studia semnificatia statistica a fenomenului, rezultatele preliminarii sugereaza un posibil efect al quercetinei (dupa 20 de minute de la aplicare) de reducere a amplitudinii curentilor nicotinici (fata de experimentul control in absenta quercetinei). Datele nu ofera indicii asupra mecanismului prin care quercitina ar putea avea un astfel de efect (ar putea fi vorba de un efect citotoxic nespecific, insa studiul datelor cinetice de inchidere-deschidere a canalelor sunt un argument in favoarea unui efect direct asupra receptorului, coroborat cu citotoxicitatea). De asemenea, poate fi vorba de un al treilea tip de mecanism implicat si anume de accelerarea procesului de desensibilizare a receptorilor nicotinici, proces cunoscut a aparea in urma stimularii repetitive a receptorilor (cum este si cazul nostru). Se contureaza astfel o prima directie de continuare a investigatiilor, cu studiul efectelor diferitor concentratii de quercitina asupra curentilor nicotinici.

Fig. 2.

    O altă idee sugerata de aceste rezultate preliminare este aceea a unor modificari de cinetica a receptorului, induse de aplicarea de quercitina. Mecanismul de actiune presupune si in acest caz inclusiv afectarea mecanismelor de desensibilizare a receptorului. De aceasta data, diferentele mari intre parametrii cinetici ai receptorilor in prezenta si in absenta quercitinei sunt mai evidente la 10 minute de la expunere decat la 20 de minute, ceea ce sugereaza un mecanism diferit de mecanismul prin care quercetina afecteaza amplitudinea curentilor de acetilcolina.

Fig. 3.

Fig. 4.

    Studiile care se vor desfasura in continuare vor avea ca scop principal elucidarea acestor efecte, sugerate de rezultatele preliminarii, in conditiile in care activitatea pana in acest moment a reusit sa determine conditiile optime de efectuare a experimentelor si a trasat directiile in care trebuie insistat.